维持培养细胞旺盛生长,有恒定而适宜的温度。不同种类的细胞对培养温度要求也不同，例如鱼、昆虫和两栖类细胞的适宜培养温度是25-28℃，哺乳动物细胞的适宜培养温度是35-37℃，发生转化的细胞则适合在高于40℃的条件下生长。人体细胞培养的标准温度为36.5℃±0.5℃,偏离这一温度范围,细胞的正常代谢会受到影响,甚至死亡。保持培养箱内恒定的温度是维持细胞健康生长重要因素。CO2培养箱的温度是通过电热丝加热的, 主要有水套式加热和气套式加热两种加热系统。
（1）水套式加热 水套式加热是通过一个独立的水套层包围内部的箱体来维持温度恒定的，其优点：水是一种很好的绝热物质，当遇到断电的时候，水套式系统就可以比较长时间的保持培养箱内的温度准确性和稳定性，有利于实验环境不太稳定（如有用电限制或经常停电）的用户选用。
（2）气套式加热 气套式加热是通过遍布箱体气套层内的加热器直接对内箱体进行加热的，又叫六面直接加热。气套式与水套式相比，具有加热快，温度的恢复比水套式培养箱迅速的特点，有利于短期培养以及需要箱门频繁开关取放样的培养。此外，对于使用者来说气套式设计比水套式更简单化（水套式需要对水箱进行加水、清空和清洗，并要经常监控水箱运作的情况，还有潜在的污染隐患）。
气套式加热优点总结：
1.重量更轻、运输或搬运更方便；
2.加热快，温度的恢复比水套式培养箱迅速，有利于短期培养以及需要箱门频繁开关取放样的培养；
3.不会发生因为漏水造成样品污染；
4.可选择更多灭菌方式（水套利用水作为传热介质，高温加热灭菌困难）。 为了满足低温培养的需求，二氧化碳培养箱厂家励精图治开发出了内置制冷系统的产物可供研究者选择，
5如何满足细胞培养湿度的要求 水是细胞的重要组成部分，在培养箱中对细胞进行培养过程里，制冷或者制热直接的影响是细胞的培养基快速蒸发失水，蒸发将导致培养基上的渗透作用增强，产生渗透性脱水；培养基中盐浓度增加，细胞中水分跑出细胞外细胞收缩，新陈代谢变缓，细胞死亡。 培养箱内相对湿度的控制室重要的，饱和湿度环境可以避免培养液中二氧化碳逃逸，保持pH值稳定，也能防止由于干燥使培养液中水分蒸发，渗透压升高，导致细胞培养失败。大多数的二氧化碳培养箱是通过增湿盘的蒸发作用产生湿气的，大型的二氧化碳培养箱是用蒸汽发生器或喷雾器来控制相对湿度水平的。一些培养箱在底部设置湿度蓄水池，这样可以增强蒸发作用，但是，这个系统也更复杂，由于复杂结构的增加一些难以预料的问题也会在使用过程中出现。
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